rna要干冰运输吗-rna要干冰运输吗知乎

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简述信息一览：

• 1、用于转录组测序的样品有什么要求?
• 2、血样干冰运输,需要注意什么?
• 3、进行欧蒙病原微生物宏基因组检测的样本放置了一个多月,还能用吗?
• 4、死叶片能提RNA吗
• 5、用于提取RNA新鲜组织如何保存
• 6、全外显子是根据什么建库的

用于转录组测序的样品有什么要求?

1、有没有懂转录组测序或者做过的朋友 样品要求： ⑴样品纯度要求： total RNA OD值应在8至2之间；电泳检测28S：18S至少大于5；⑵样品浓度： total RNA浓度不低于400ng/ul；样品总量不低于15ug；⑶请提供total RNA样品具体浓度、体积、制备时间、溶剂名称及物种来源。

2、转录组（transcriptome）广义上指某一生理条件下，细胞内所有转录产物的***，包括信使RNA、核糖体RNA、转运RNA及非编码RNA；狭义上指所有mRNA的***。转录组测序一般是对用多聚胸腺嘧啶（oligo-dT）进行亲和纯化的RNA聚合酶II转录生成的成熟mRNA和ncRNA进行高通量测序。

3、所有样品的编号尽量简洁明了，避免容易混淆的编号和特殊符号，所有样品均应提供相应的引物信息，寄样品时，请注意做好缓冲保护包装，防止样品受到挤压而碎裂。

4、③ 对于临床样品，由于供试者的基因型、生活方式、生活环境、年龄、性别可能存在较大差异，可能需要更多的生物学重复，一般10个生物学重复以上[4]。 Tips 在转录组测序时，一般不建议设置两个重复。因为如果两个重复样品结果不一致，无法确定以哪个数据为参考。

5、我们将常见转录组测序的样品分为五大类： 植物、动物、血液、微生物和互作类型 ，不同的类型对于取样方法和要求不尽一致，下面就一一介绍一下。 植物组织 ：植物组织一般要求重量大于 4g。

6、根据你的测序需要，如果是仅仅检测表达，可以使用单端的短序列测序，一般10M以上reads都满足要求，如果是还要检测SNP或可变剪切以及新基因之类的话需要使用更长片段的双端测序，一般2x100以上或者2x125，数据量大概在2-3G以上，当然越多越好。

血样干冰运输,需要注意什么?

1、最好选择小时递。跨城跨省寄件当天到，包括金域医检、迪安诊断、艾迪康等很多医疗公司，都是用小时递来寄加急的血样。

2、直接用小时递运就行，干冰和样品都可以运输。很多医疗检测公司的低温血样样品都用小时递寄，跨城跨省寄当天到，长三角地区3小时送达，全国6~8小时送达。

3、寄快递没有冰袋的话可以用两三个保鲜袋套一起装上水放冰箱冷冻室冻成冰块，用这种冰袋的时候要注意扎紧口子免得冰化了变成水流出来。如果时间紧急来不及冻冰块的话可以联系快递员让对方提供冰袋以及干冰，只是让他们提供的话要额外收取包装费。

4、小时递啊，现在包括金域医检、迪安诊断、艾迪康、杭州千麦等做医疗检测的公司，都用小时递寄血样，跨城跨省寄件都是当天到，运输时间短，确保血样安全无虞。

5、危险品运输还需要有危险品道路运输许可证，有些要配押运员，安全方面要求会更高。具体还要看运输的是什么货物，多重，运输的距离，一般来说，危运费会高点。

6、小时递可以，目前全国最大的几家医疗检测机构，包括金域医检、迪安诊断、艾迪康、杭州千麦等等，都是用小时递来寄血样啊之类的生物检测样品。小时递是全国当天寄当天到，安全高效。

进行欧蒙病原微生物宏基因组检测的样本放置了一个多月,还能用吗?

1、因此，若样本保存在-80℃是可用的，否则建议重新***样。

2、对NCBI、PATRIC、EuPathDB、VIPR等公共数据库进行整合，欧蒙未一病原体基因组数据库目前涵盖数万种病原体，其中核心数据库包含1000多种明确具有致病性的五种，各类病原体的物种分布情况如下：细菌4900+、病毒6100+、真菌1900+、***330+、分枝杆菌260+、支原体/衣原体/立克次氏体180+。

死叶片能提RNA吗

1、能。因为RNA很容易降解，而且植物对环境的变化会非常快的反应在RNA的表达水平上，所以即便很短暂的处理，都会对RNA的表达水平有很显著的影响。所以不可能用冰袋什么的来保存。必须是液氮速冻才能保证RNA的相态保持在刚***摘时的状态。我当时就是背了一个液氮罐，里面放了十升的液氮。

2、CTAB法中是加入LiCl这一步除去的DNA。氯化锂可以选择性沉淀RNA。

3、绿色植物叶片提取的RNA中可能含有大量的叶绿体RNA，23s，15s等。所以这个结果可能是正常的。当然因为没有marker，也不排除部分RNA出现降解。

4、你需要研究植物哪个部位的基因，就提取哪个部位的RNA。不同部位的RNA总类是不一样的，小型植物可以取整株，大型植物就看你研究的目的。植物组织越新鲜，越好提取。

5、因为CTAB法提取的DNA总会或多或少地有RNA残留，并不影响一般的PCR实验。如果有特殊实验需要去除RNA，常用的方法是加RNA酶进行消化。

6、植物组织的话，一般是幼嫩组织比较容易提取出来，而且提出来的RNA质量较好。因为老叶中本身多糖蛋白质含量就较多，会影响提取。组培的材料是最好的提取RNA的材料，如果是大田的话，最好选取心叶，也就是刚刚长出来的叶子。

用于提取RNA新鲜组织如何保存

rna保护液可以提蛋白，RNA长效保存液是一种能高效抑制RNase活性的新型小分子混合物，用于防止RNase对RNA的降解作用。组织RNA长效保护液从新鲜组织细胞中提取RNA时，由于各种原因若不能马上处理样品，即使－70℃保存样品中的RNA也不稳定容易降解，而液氮保存既昂贵又不方便。

总RNA提取试剂盒步骤： 样品处理： a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

使用RNAstore保存的细胞：未有效离心。RNAlater密度大于一般的细胞培养 液，离心时应加大离心力，可以3000×g离心。◆ A260/A280比值低：洗脱时不使用RNase-Free 水，使用10 mM Tris.Hcl， pH 5作为洗脱液。◆ RNA降解： 提取的材料不新鲜。

当然是放在ep管中，在这个过程中起抑制作用的是低温，不是氮分子的直接接触。

使用该试剂可以同时提取DNA及蛋白质。提取的RNA样品可以用于后继的RT-PCR、Northern blot、dot杂交及体外转录等实验。回收的DNA片段可以用于PCR反应。血液样品的保存：为了保证提取效果，请选择新鲜的血液进行RNA的提取。在收集到血液样品后，需要加入抗凝剂。

全外显子是根据什么建库的

外显子组是指全部外显子区域的***，在人类基因组中，该区域仅占1%，却包含合成蛋白质所需要的重要信息，涵盖了与个体表型相关的大部分功能性变异。全外显子组测序是利用序列捕获技术，将全基因组外显子区域的DNA捕捉、富集之后，进行高通量测序的基因组分析方法。

外显子组（Exome）是一个物种基因组中全部外显子区域的总和，是遗传物质中编码蛋白质的DNA序列，占整个基因组的1%-2%。外显子组分析有助检测出和疾病相关的编码区突变，从而研究DNA变异对正常生物学机制与疾病发病机制的影响。

我们测试PE100bp，外显子文库大小约为250bp，这样可以匹配大多数外显子的平均大小，结果中没有重叠的读对。 RNA-seq文库大小也是由应用决定的。对于基因表达分析我们***用SE100的测序。但是对于，可变剪切或转录起始终止位点的判定，我们选择PE100的方案。大多数应用中，RNA在片段化之前会逆转录成cDNA的形式。

例如人类全基因组大小约为3Gb，外显子区域仅占2%（约60M），全基因组测序（WGS）深度一般为30X—50X，单样本数据产出为90Gb-150Gb，全外显子测序深度一般为100X-200X，数据产出为6-12Gb，而针对一个目标区域大小为2M的panel来说，测序深度2000X，数据量也仅为4Gb。

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